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谷魁广 医师
家庭医生在线合作医院
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内科
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一、培养基组成成份:RPMI1640、血清、肝素、PHA等。二、使用方法:在酒精灯旁直接把采集到的外周血0.2—0.4mL接种到每瓶培养基内,注意摇匀,置37℃培养68或69小时,用7#针头每瓶加2—3滴秋水仙素(20微克/毫升)摇匀,继续培养3小时左右,即可制片。显带:先将玻片放在预温至37℃的0.25%胰酶溶液中(PH=7.2-7.4)消化1分左右,每次作用时间并不完全相同。可先试一张片子,再根据显带效果调整胰酶作用时间,再放在预温至37℃的0.75%Nacl溶液中漂洗两次,在预温至37℃的Giemsa溶液中染色10分钟,自来水冲洗干净,用吹风机吹干后,即可阅片。
2016-01-20 21:30
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李希弘 医师
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全科
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操作程序:1.采血:用10:2肝素(10%)温润无菌注射器抽取外周血2ml(注意:消毒时需脱碘)。2.种血:将注射器搓捏,使血样混匀,在无菌条件下,用7#针头垂直种血28-32滴(一般成年男子28滴,成年女子30滴,儿童32滴左右)至外周血培养基内。3.培养:将培养瓶放入37℃恒温箱中培养68-72小时,培养期间注意观察培养液有无凝血、溶血或长菌的现象,可每天将培养液摇一摇,以便细胞可获得充分的营养,一般情况下可不摇。4.制片:加秋:在培养完成前2-3小时,加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3小滴(7#针头竖滴)后,继续培养2-3小时。离心:将培养液用吸管吸至离心管中(10ml离心管)2000转/分×10分钟,弃上清,留沉淀。低渗:加入已预温至37℃的0.075mol/L氯hua钾溶液约8ml,用吸管充分打匀,放入37℃水浴箱中,温育30分钟。预固定:向离心管中加入现配的预温至37℃的甲醇、冰醋酸固定液(3:1)1ml左右,轻轻混匀,置室温下5分钟,2000转/分×10分钟,弃上清,留沉淀。固定:沿管壁缓慢加入现配的预温至37℃的新配固定液约8ml,轻轻混匀,然后2000转/分离心10分钟。加入固定液再次固定。弃上清,用固定液将沉淀调成细胞悬液(不宜太浓,一般加固定液至0.5ml)在冰片上滴片,每张片上滴2滴。烤片:立即放入75℃烤箱中烤片3小时。
2016-01-20 18:53
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杨东银 医师
安都卫生院
一级
内科
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培养基组成成份:RPMI1640、血清、肝素、PHA等。二、使用方法:在酒精灯旁直接把采集到的外周血0.2—0.4mL接种到每瓶培养基内,注意摇匀,置37℃培养68或69小时,用7#针头每瓶加2—3滴秋水仙素(20微克/毫升)摇匀,继续培养3小时左右,即可制片。显带:先将玻片放在预温至37℃的0.25%胰酶溶液中(PH=7.2-7.4)消化1分左右,每次作用时间并不完全相同。可先试一张片子,再根据显带效果调整胰酶作用时间,再放在预温至37℃的0.75%Nacl溶液中漂洗两次,在预温至37℃的Giemsa溶液中染色10分钟,自来水冲洗干净,用吹风机吹干后,即可阅片。
2016-01-20 11:51
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